REVISTA CON-CIENCIA Nº1/VOL. 8:21-28, NOVIEMBRE 2020, ISSN: 2310-0265
Trazabilidad metrológica de un estándar secundario a un están- dar primario de ciclosporina para pruebas de biodisponibilidad
TRIGO ORSINI MYRIAM LINA1
CONDORI ESPINOZA ALEJANDRA SILVIA *
Metrological traceability of a secondary standard to a primary cyclosporine standard for biodability tests
FECHA DE RECEPCIÓN: 15 JULIO 2020 FECHA DE ACEPTACIÓN: 10 AGOSTO DE 2020
Resumen
Introducción: El proceso de trazabilidad metrológica de un estándar secundario a uno primario es una propiedad del resultado de una medición o del valor de un estándar, por la cual se puede relacionar a referencias esta- blecidas, usualmente nacionales o internacio- nales, a través de una cadena ininterrumpida de comparaciones, todas las cuales tienen in- certidumbres determinadas.
Objetivo: Realizar la trazabilidad de un estándar secundario a uno primario de ciclos- porina y de esta manera asegurar la calidad y pureza del mismo.
Métodos: Se utilizaron los siguientes mé- todos: descripción organoléptica, solubilidad,
Introduction: The metrological tracea- bility process from a secondary standard to a primary one is a property of the result of a measurement or the value of a standard, by which it can be related to established referen- ces, usually national or international, through an uninterrupted chain of comparisons, all of which have certain uncertainties.
Objective: To carry out the traceability of a secondary standard to a primary one of cy- closporine and in this way to ensure its quality
and purity.
Methods: The following methods were used: organoleptic description, solubility, identification and quantification by reversed phase High Performance Liquid Chromatogra-
Jefe de Laboratorio Control de Calidad de Medicamentos y Biodisponibilidad del Instituto de Servicios de Laboratorio de Diagnostico e Investi- gación en Salud – SELADIS, Universidad Mayor de San Andrés, Av. Saavedra 2224. La Paz, Bolivia.1 ORCID: https://orcid.org/0000-0002-0874-4093
Auxiliar de Investigación, Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas, Universidad Mayor de San Andrés, Av. Saavedra 2224. La Paz, Bolivia* mylitrigo@gmail.com
ORCID: https://orcid.org/0000-0002-2251-0218
identificación y cuantificación por Cromatogra- fía Líquida de Alta Resolución (HPLC) en fase reversa.
Resultados: El estándar secundario de ci- closporina, cumplió con todas las especificacio- nes referidas a descripción organoléptica, solu- bilidad, identificación y se obtuvo una pureza de 97,5% utilizando un estándar primario cuyo título es de 98,5 %.
Conclusión: Se realizó la trazabilidad me- trológica de un estándar secundario a un están- dar primario para poder utilizarlo como están- dar de trabajo, garantizando el título del mismo. Esta propiedad es uno de los pilares para que los resultados de medida sean comparables entre sí, independientemente del lugar y tiem- po en el que se hayan realizado, facilitando su aceptación universal y reduciendo las potencia- les barreras técnicas al comercio.
phy (HPLC).
Results: The secondary cyclosporine stan- dard met all the specifications referred to or- ganoleptic description, solubility, identification and a purity of 97.5% was obtained using a pri- mary standard whose titer is 98.5%.
Conclusion: The metrological traceability of a secondary standard to a primary standard was carried out in order to be able to use it as a working standard, guaranteeing its title. This property is one of the pillars for the measure- ment results to be comparable with each other, regardless of the place and time in which they have been carried out, facilitating their univer- sal acceptance and reducing potential technical
barriers to trade.
PALABRAS CLAVES
Trazabilidad, ciclosporina, estándar primario, estándar secundario, biodis- ponibilidad.
KEYWORDS
Traceability, cyclosporine, primary standard, secondary standard, bioa- vailability.
El proceso de trazabilidad metrológica de un estándar secundario a uno primario es una propiedad del resultado de una medición o del valor de un estándar, por la cual se puede relacionar a referencias establecidas, usual- mente nacionales o internacionales, a través de una cadena ininterrumpida de comparaciones, todas las cuales tienen incertidumbres determinadas; de esta manera se buscará un procedimiento adecuado para el análisis, obte- niendo un estándar secundario trazado asegurando la calidad y pureza del mismo, para así poder utilizarlo como estándar de trabajo.
Sustancia química de referencia primaria
Sustancia química de referencia secundaria
yas características se asignan o calibran por comparación con una sustancia química de referencia primaria. El alcance de la caracterización y las pruebas de una sustancia química de referencia secundaria puede ser menor que para una sustancia química de referencia primaria. Esta definición puede aplicarse, entre otras cosas, a algunas sustancias denominadas “patrones de trabajo”.
Importancia de la trazabilidad
Permite la comparación entre los resultados a través del tiempo y el lugar:
Pasos importantes para obtener trazabilidad
y establecer unidades de medición
Obtener materiales de referencia apropiados.
Ciclosporina
Es un fármaco inmunosupresor ampliamente usado en el trasplante de órga- nos, con el fin de reducir la actividad del sistema inmunitario.
Fig. 1. Estructura química de la ciclosporina
Mecanismo de acción
La ciclosporina disminuye la respuesta inmunitaria celular, inhibiendo la producción de anticuerpos T-dependientes. También inhibe la producción y liberación de linfocinas, incluyendo interleucina 2.
Dosificación
Trasplante de órganos: Oral, inicio: 10 – 25 mg/Kg/día en 2 dosis, durante 12 horas antes del trasplante y mantener 1 a 2 semanas: mantenimiento 2 – 6 mg/Kg/día en 2 dosis en administración con otros inmunosupresores: 3 – 6 mg/Kg/día en 2 dosis
Perfusión IV (2 – 6h) 1/3 dosis mg/Kg/día oral.
Contraindicaciones
Hipersensibilidad a la ciclosporina. Enfermedades autoinmunes con alte- ración de la función renal (excepto proteinuria en pacientes con síndrome nefrótico), hipertensión arterial (HTA) no controlada.
Pacientes con psoriasis que están recibiendo otros inmunosupresores y radioterapia.
Interacciones.
Antibióticos macrólidos, ketoconazol, fluconazol, verapamilo, metoclo- pramida, metilprednisolona, alopurinol, amiodarona, inhibidores de la pro- teasa, colchicina, barbitúricos, carbamazepina, fenitoína, aminoglucósidos, naproxeno, diclofenaco, metotrexato.
Biodisponibilidad aumentada por ingesta concomitante de zumo de pome- lo.
Reacciones adversas.
Disfunción renal, hipertensión arterial (HTA), temblor, cefaleas incluyendo migraña, anorexia, náuseas y vómitos, dolor abdominal, diarrea, hiperplasia gingival, disfunción hepática, calambres musculares, mialgia, fatiga.
MATERIALES Y MÉTODOS
Acetonitrilo calidad HPLC, Ácido fosfórico para análisis, Agua grado HPLC
Los equipos utilizados fueron: Balanza analítica, con una sensibilidad de 0,1 mg; Cromatógrafo Líquido de Alta Resolución
Material de laboratorio: matraces volumétricos, pipetas volumétricas, vasos de precipitados y otros
Procedimientos de Trabajo
Pruebas para trazabilidad metrológica de ciclosporina de un estándar se- cundario a un estándar primario:
Características organolépticas
Solubilidad
Pérdida por secado
CARACTERÍSTICAS ORGANOLEPTICAS
SOLUBILIDAD
IDENTIFICACION Y CUANTIFICACION POR HPLC
IDENTIFICACION
CUANTIFICACION APTITUD DEL SISTEMA
Inyectar entre 6 a 10 veces la solución estándar de concentración de 625ng/ml, utilizando como solvente Acetonitrilo:Agua (50:50) y cal- cular:
Precisión, expresada como el coeficiente de variación obte- nido a partir de 6 a 10 inyecciones repetidas de solución de estándar de trabajo, según USP 37.
Parámetros cromatográficos
Factor de capacidad
Número de platos teóricos (N):
Factor de asimetría o de cola (tailing)
Cálculo para la pureza del estándar secundario
Calcular el porcentaje de ciclosporina (C62Hrn N11012) en la porción de Ciclosporina tomada:
Resultado = (ru/rs) x P x 100
ru = área del pico de ciclosporina de la Solución muestra
rs = área del pico de ciclosporina de la Solución estándar
RESULTADOS
DESCRIPCION ORGANOLEPTICA
Tabla N°1: Características organolépticas de la muestra
Características | Ciclosporina |
Color | Forma cristales prismáticos blancos de acetona |
Olor | Característico |
Aspecto | Polvo blanco |
Forma de la partícula | Agujas prismáticas blancas (de acetona) o polvo blanco. |
Fuente: Elaboración propia
SOLUBILIDAD
Tabla N°2: Solubilidad de la muestra
SOLVENTE | SOLUBILIDAD | REQUISITO |
METANOL ETANOL ACETONA CLOROFORMO AGUA | SOLUBLE SOLUBLE SOLUBLE SOLUBLE INSOLUBLE | SOLUBLE SOLUBLE SOLUBLE SOLUBLE INSOLUBLE |
Fuente: Elaboración propia
Nota. El requisito fue obtenido de Adaptado de “cyclosporins”, THE MERCK INDEX FIFTEENTH EDITION
IDENTIFICACION POR HPLC:
Gráfico N°1: Cromatograma del estándar primario de ciclosporina 625ng/ml
Fuente: Datos primarios del HPLC
Gráfico N°2: Cromatograma de la muestra de ciclosporina 625ng/ml (estándar se- cundario)
Fuente: Datos primarios del HPLC
CUANTIFICACIÓN
APTITUD DEL SISTEMA CICLOSPORINA STD PRIMARIO 625(ng-ml)
| ||||
CONDICIONES DEL MÉTODO ANALÍTICO | ||||
MODO | HPLC | |||
LONGITUD DE ONDA | UV 210 nm | |||
COLUMNA | 4,6mm x 250 mm; relleno C8 | |||
VELOCIDAD DE FLUJO | 1,4 mL/min | |||
VOLUMEN DE INYECCIÓN | 50 µL | |||
TEMPERATURA | 75ºC | |||
TIEMPO DE CORRIDA | 40 min | |||
ENSAYO DE APTITUD DEL SISTEMA - HPLC | ||||
ÁREAS (CICLOSPORINA) 625 ng/ml | tR (CICLOSPORINA) | W CICLOSPORINA | to (CICLOSPORINA) | |
AREA 1 | 44909 | 28,95 | 0,400 | 1,360 |
AREA 2 | 44395 | 29,01 | 0,394 | 1,357 |
AREA 3 | 44149 | 29,10 | 0,394 | 1,360 |
AREA 4 | 44432 | 29,42 | 0,391 | 1,358 |
AREA 5 | 44413 | 28,90 | 0,398 | 1,362 |
AREA 6 | 44569 | 29,08 | 0,398 | 1,362 |
PROMEDIO | 44477,83333 | 29,07 | 0,40 | 1,36 |
S | 251,202 | 0,184 | 0,003 | 0,002 |
CV (RSD) | 0,565 | 0,634 | 0,852 | 0,150 |
CRITERIO DE ACEPTACIÓN PARA PRECISIÓN | <2,000 | <2,000 | - | - |
CONCLUSION | SISTEMA APTO | SISTEMA APTO | - | - |
N (CICLOSPORINA) | As(0,05) CICLOSPORINA | k CICLOSPORINA | R CICLOSPORINA | |
83792,9 | 0,997 | 20,285 | N/A | |
86758,7 | 1,059 | 20,380 | N/A | |
87249,8 | 1,077 | 20,393 | N/A | |
90565,6 | 1,000 | 20,662 | N/A | |
84333,3 | 1,024 | 20,215 | N/A | |
85399,0 | 0,958 | 20,349 | N/A | |
PROMEDIO | 86349,87809 | 1,02 | 20,38 | N/A |
S | 2459,997 | 0,044 | 0,153 | N/A |
CV (RSD) | 2,849 | 4,289 | 0,750 | N/A |
CRITERIO DE ACEPTACIÓN PARA PARÁMETROS CROMATOGRÁFICOS | >2000 | <2,000 | - | - |
CONCLUSION | EFICIENCIA ADECUADA | SIMETRIA ADECUADA | - | - |
CONCLUSION: | Se concluye que el Sistema es Apto para realizar los análisis respectivos de Cuantificación de Ciclosporina. | |||
OBSERVACIONES: | Se trabajo con Estándar Primario de Ciclosporina (USP-U.S. PHARMACOPEIAL CONVENTION) LOTE:J0M382 PUREZA: 0,985mg/mg (Para aplicaciones cuantitativas) | |||
CALCULO DE LA PUREZA DEL ESTANDAR SECUNDARIO
CICLOSPORINA ESTANDAR PRIMARIO 625(ng/ml) | CICLOSPORINA ESTANDAR SECUNDARIO 625(ng/ml) | ||
ESTÁNDAR PRIMARIO | ÁREAS (CICLOSPORINA) 625 ng/ml | ESTÁNDAR SECUNDARIO | ÁREAS (CICLOSPORINA) 625 ng/ml |
ESTANDAR 1 | 44909 | MUESTRA 1 | 44067 |
ESTANDAR 1 | 44395 | MUESTRA 1 | 44041 |
ESTANDAR 2 | 44149 | MUESTRA 2 | 44071 |
ESTANDAR 2 | 44432 | MUESTRA 2 | 44010 |
ESTANDAR 3 | 44413 | MUESTRA 3 | 44035 |
ESTANDAR 3 | 44569 | MUESTRA 3 | 44064 |
PROMEDIO 1 |
44652 | PROMEDIO 1 |
44054 |
PROMEDIO 2 | 44291 | PROMEDIO 2 |
44041 |
PROMEDIO 3 | 44491 | PROMEDIO 3 |
44050 |
PROMEDIO | 44478 | PROMEDIO | 44048 |
CONCENTRACION ESTANDAR(ng-ml) | 625 ng/ml | Resultado = (ru/rs) x P x 100 RESULTADO = 97,55 % | |
PUREZA | 0,985 | ||
El estándar de trabajo tiene un título de 97,55%
De acuerdo a los resultados obtenidos se puede concluir que:
La trazabilidad de un estándar secundario a uno primario de ciclosporina puede realizarse mediante una cadena ininterrumpida de comparaciones: la descripción organoléptica, determinación de solubilidad e identificación y cuantificación por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC).
Se realizó la trazabilidad metrológica de un estándar secundario a un es- tándar primario de tal manera que el estándar secundario de la ciclosporina puede ser utilizado como estándar de trabajo, debido a que se tiene el título del mismo. Esta propiedad es uno de los pilares para que los resultados de medida sean comparables entre sí, independientemente del lugar y tiempo en el que se hayan realizado, facilitando su aceptación universal y reducien- do las potenciales barreras técnicas al comercio.
Aspapel. (2017).guía de directrices 2012.qxd (pdf). Disponible en: www.aspapel.es.Fecha de consulta: 12 de marzo de 2017.
METROLÓGICA, T. GUÍA TÉCNICA SOBRE TRAZABILIDAD METROLÓGICA E INCER- TIDUMBRE DE MEDIDA PARA PRODUC- TORES DE MATERIALES DE REFERENCIA.
OMS. (2017). Anexo 3 informe 35 Directrices generales para el establecimiento, el man- tenimiento y la distribución de sustancias químicas de referencia. Fecha de consulta: 11 de marzo de 2017
Panteghini, M., Myers, G. L., Miller, W. G., & Greenberg, N. (2009). La importancia de la trazabilidad metrológica en la validez de la medición de creatinina como índice de función renal. Acta bioquímica clínica lati- noamericana, 43(2), 271-277.
Pubchem. (2017). cyclosporin A. Disponible en: https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/com- pound/cyclosporin_a. Fecha de consulta: 29 septiembre de 2017.
Quintana-Ponce, S., Rea-Vázquez, M. G., & Barlandas-Rendón, N. R. E. (2017). Trazabili- dad metrológica en los laboratorios clínicos y bancos de sangre acreditados en Méxi- co. Revista Latinoamericana de Patología Clínica y Medicina de Laboratorio, 63(4), 214-218.
Riu, J., Boqué, R., Maroto, A., & Rius, F. X. (2000). Exactitud y trazabilidad. Técnicas de Labo- ratorio. En: Universidad & Empresa, 22(254), 1.
Rodríguez, A., Mercader, F., López, M. G., He- rrera, R., Reyes, A., Antaño, R., & Álvarez, A. SOBRE LA METROLOGÍA Y TRAZABILIDAD METROLÓGICA EN LOS RESULTADOS DE
MEDIDAS ELECTROQUÍMICAS.
S/a.(2017).Estándar mundial de trazabilidad (pdf). Disponible en: www.gs1.org.ar Fecha de consulta: 11 de marzo de 2017.
S/a.(2017).Trazabilidad (pdf). Disponible en: www.dominiopriting.com Fecha de consul- ta: 11 de marzo de 2017.
Samplón, M., & Artal, J. S. EXPOSICION DO- CENTE DE LOS CONCEPTOS DE CALIBRA- CIÓN, TRAZABILIDAD METROLÓGICA E INTERCOMPARACIÓN.
THE MERCK INDEX. (2013).the Merck index an encyclopedia of chemicals, drug and bio- logicals.fifteenth edition. The royal society of chemistry. Cyclosporins. pp. 2751.
THE UNITED STATES PHARMACOPEIAL CON-
VENTION. (2014). Farmacopea de los Es- tados Unidos de América USP-37. Estados Unidos de América: United book press, inc. pp.2677-2678.
UNAN-león. (2017).Laboratorio de control de calidad de medicamentos (pdf). Disponible en: www.riul.unanleon.edu.ni.Fecha de consulta: 12 de marzo de 2017.
Universidad panamericana. (2017). guía para la elaboración y presentación de proyec- tos de investigación e informe final. (pdf). Disponible en: www.guia de investigacion.
es.Fecha de consulta: 12 de marzo de 2017.
Vademécum. (2017).Ciclosporina. Disponible en: www.vademecum.es. Fecha de consul- ta: 12 de marzo de 2017.
